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电泳条带很淡，能用于割胶回收吗
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我的电泳图条带很暗，我想做割胶回收，不知道条带淡了，做回收有没有意义？ 还有请高人分析一下为什么我的电泳条带会这么淡啊 ，我的DNA用的是试剂盒提的，浓度比较低，只有20~30ng/ul.但是配50ul的体系时，我加了4ul。应该怎样改善，才能得到比较好的条带呢，O(∩_∩)O谢谢了 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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reallpf
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 欢迎交流经验 2012-07-16 15:24:12
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 欢迎交流经验 2012-07-16 15:24:12
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首先可以肯定电泳条带较淡，仍然是可以回收的。 根据情况给你一下个人建议： 对于提质粒： buffer 2处理时间久一些，2min为宜。Washing buffer只洗脱一次。加Elution buffer后将柱子放于60度2min，高速离心洗脱。可以有效提高提得质粒浓度。 对于PCR： 可以适当增加1-5个循环。增加PCR管数。降低退火温度。利用PCR产物，稀释（50、100、200）倍后做模版再做PCR。 对于胶回收： 割胶后加入buffer 60度溶胶后一定冰浴2min（增加DNA与柱子的结合率）。加Elution buffer后将柱子放于60度2min，高速离心洗脱。 |
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栀子花11206楼2012-07-16 14:37:57