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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电泳条带很淡，能用于割胶回收吗
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栀子花1120

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳条带很淡，能用于割胶回收吗

我的电泳图条带很暗，我想做割胶回收，不知道条带淡了，做回收有没有意义？

还有请高人分析一下为什么我的电泳条带会这么淡啊  ，我的DNA用的是试剂盒提的，浓度比较低，只有20~30ng/ul.但是配50ul的体系时，我加了4ul。应该怎样改善，才能得到比较好的条带呢，O(∩_∩)O谢谢了
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1楼 2012-07-13 13:47:42
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栀子花1120

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-16 14:37:57
首先可以肯定电泳条带较淡，仍然是可以回收的。
根据情况给你一下个人建议：
对于提质粒：
buffer 2处理时间久一些，2min为宜。Washing buffer只洗脱一次。加Elution buffer后将柱子放于60度2min，高速离心洗脱。 ...

万分感谢，我再改善条件试试看，O(∩_∩)O谢谢
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7楼2012-07-17 21:49:39
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栀子花1120

新虫 (初入文坛)
我的条带很淡，但我今天还是做了一下胶回收，回收后测DNA得浓度只有5ng/nl,根本不法做回收，我提的是基因组DNA，提取后测得浓度为13.3ng/ul,现在我不知道该怎么做了，基因组浓度这么低，增加循环数和降低退火温度对于浓度这么低的DNA能行吗，还是说我应该重新提DNA，增加DNA浓度比较好呢

还有我割胶后的浓度这么低，还需要做二次PCR吗，这个问题可能有点低级，但才刚刚开始做，很多都不是很懂，各位见笑了   O(∩_∩)O谢谢
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8楼2012-07-17 22:06:44
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