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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双缩脲法测蛋白含量标准曲线绘制中出现的问题
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 双缩脲法测蛋白含量标准曲线绘制中出现的问题

以双缩脲法测定蛋白含量，在绘制标准曲线时，1ml标液与4ml双缩脲试剂反应显色30min后测定吸光度值，为何吸光度值总在0.2以下？ 且反应液不呈紫红色而是由蓝色的由淡黄色的？请各位大侠指示，谢谢！
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1楼 2012-07-05 17:05:44
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yuli121121

铜虫 (初入文坛)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
在做实验过程中，本人也遇到这样的问题，跪求楼主指点最后是怎么解决的。。。不胜感激
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24楼2014-10-17 09:48:29
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
楼主真好！
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4楼2012-07-05 18:11:38
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
???~~~~~~~~~~~~~~~~~
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5楼2012-07-05 18:17:28
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捡金小儿

新虫 (著名写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
添人气的！
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11楼2012-07-05 18:34:32
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
是不是试剂存在问题呀，还有蛋白会不会变性了
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12楼2012-07-05 18:38:35
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-05 18:38:35
是不是试剂存在问题呀，还有蛋白会不会变性了

蛋白肯定是没有变性的，而双缩尿试剂是按照标准配制的，1.5克硫酸铜和6.0克酒石酸钾钠溶于500ml蒸馏水，在搅拌下加入300ml 10%氢氧化钠，用水定容至1000ml。现在就是不知道问题出在哪里了。。。
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13楼2012-07-05 20:44:48
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
那楼主可以换个方法测定的，我们实验室一般采用的考马斯亮蓝法测定的
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14楼2012-07-06 08:44:28
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biomater

银虫 (著名写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
0.2以上还是很容易的啊，我测试0.3以上的数据都有啊！颜色是很蓝很蓝，有点紫色的样子，不显黄色！
我用的是总蛋白测定试剂试剂盒。
显色反应在37℃水浴10min。
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15楼2012-07-06 10:15:50
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-06 08:44:28
那楼主可以换个方法测定的，我们实验室一般采用的考马斯亮蓝法测定的

其实，蛋白含量测定方法很多，我是以双缩脲法测定谷胱甘肽含量的，反正都是基于2个肽键的反应嘛，但是结果很不好。
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16楼2012-07-06 15:57:32
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by biomater at 2012-07-06 10:15:50
0.2以上还是很容易的啊，我测试0.3以上的数据都有啊！颜色是很蓝很蓝，有点紫色的样子，不显黄色！
我用的是总蛋白测定试剂试剂盒。
显色反应在37℃水浴10min。

双缩脲法测定蛋白的含量范围是1--10mg嘛，但是我以8mg、10mg谷胱甘肽标样测定时，吸光度值也不超过0.2的，就是不知道原因。

PS：我是以双缩脲法测定蛋白含量的原理来测定谷胱甘肽含量的
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17楼2012-07-06 16:02:11
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biomater

银虫 (著名写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
波长多少？540nm？不会啊。。。这个量应该会出现0.3以上的

[ Last edited by biomater on 2012-7-6 at 18:04 ]
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18楼2012-07-06 18:01:16
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by biomater at 2012-07-06 18:01:16
波长多少？540nm？不会啊。。。这个量应该会出现0.3以上的

嗯，540nm
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19楼2012-07-07 12:09:46
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张枫12345678

新虫 (小有名气)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
有没有正确的标准曲线啊？急求
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21楼2013-05-23 10:32:09
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jullo

新虫 (初入文坛)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
我的也有這個問題
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22楼2013-12-16 15:19:17
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jullo

新虫 (初入文坛)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
我也是遇到這個問題，只不過我之前配製時還有吸光值
怎麼重配試劑後，怎麼反應都到達不到
試劑都有開新的藥了
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23楼2013-12-17 00:55:25
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xipha

木虫 (正式写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
这个氢氧化钠溶液要新配. 楼主的氢氧化钠是不是旧的.
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25楼2014-10-18 00:13:38
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a877745785

新虫 (初入文坛)
2333333

[ 发自小木虫客户端 ]
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26楼2014-10-18 00:21:58
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silvial0308

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问一下楼主，药典中的双缩脲配制方法跟你这个不一样，双缩脲的配制会不会有影响？而且你的标准溶液是用什么稀释的，是水还是0.05mol/l氢氧化钠？
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27楼2015-01-19 14:57:19
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silvial0308

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主，我也查阅了一些资料，双缩脲试剂的配制一般都是用你的这个方法，但是药典上的方法跟你的不太一样，会不会有影响？而且你的标准溶液时用什么稀释的，是水还是0.05mol/l的氢氧化钠溶液
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28楼2015-01-19 15:01:35
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cilinxue2楼
2012-07-05 17:33   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
cilinxue3楼
2012-07-05 17:33   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
userhung6楼
2012-07-05 18:17   回复  
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啄虫鸟7楼
2012-07-05 18:28   回复  
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yaoyao1458楼
2012-07-05 18:28   回复  
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yaoyao1459楼
2012-07-05 18:28   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
liang888710楼
2012-07-05 18:30   回复  
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yingying158820楼
2012-07-07 17:44   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
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