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ssdghf

铜虫 (小有名气)

[交流] 双缩脲测乳中的酪蛋白中的问题 已有3人参与

最近在测乳中的酪蛋白,可是整死我了。样品处理完后,发现有絮状沉淀,我了个晕了,最后测下来显然不对了,吸光度极高。我重复了好几遍,都阵亡了。不得不让我改方法啊。但是见很多文献上都是这么测的,我就不解,为什么我就重复不了。各位大牛们,给小弟解答解答吧!谢谢!
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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树树8013(金币+2, 食品EPI+1): 谢谢专家跟踪讨论。 2012-01-02 13:19:00
假如缓冲体系ph接近4.5左右,则有部分酪蛋白(不够纯)会发生沉淀,影响测定值
12楼2011-12-29 22:02:10
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

各位大牛帮帮忙啊!
2楼2011-12-29 10:11:14
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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sweety(金币+2, 专家考核): 感谢专家分享,留级生专家近期相当尽职尽责! 2011-12-29 10:31:02
酪蛋白等电点4.5左右,你测定时ph控制情况怎样?
3楼2011-12-29 10:26:04
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 留级生2005 at 2011-12-29 10:26:04:
酪蛋白等电点4.5左右,你测定时ph控制情况怎样?

PH是没问题的,我都测过了 准着呢。
4楼2011-12-29 12:31:19
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)


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把你的具体方法说说,看看有无问题?
5楼2011-12-29 16:07:01
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 留级生2005 at 2011-12-29 16:07:01:
把你的具体方法说说,看看有无问题?

1、标准曲线的绘制(这个就不说了,肯定没问题,做出来是3个9)
2、样品的测定
吸取10ml乳样,加入等量的pH=4.6的HAC-NaAC缓冲液(0.2mol/l),混匀,沉淀酪蛋白。然后在4000r/min下离心10min,收集沉淀用于测定酪蛋白含量。为防止酪蛋白沉淀中混有脂肪而影响测定,再用10ml乙醚-乙醇混合液(体积比1:1)洗涤并在上述条件下离心,收集沉淀,用0.1mol/lNaOH溶解,并准确定容到50ml。然后取酪蛋白溶解也1ml,加4ml双缩脲试剂,室温下反应30min,在540nm下测定吸光值,并与标准曲线比对,计算酪蛋白含量。
         方法就是这样,但就是样品测定时候吸光度极高,而且我发觉有絮状沉淀。
6楼2011-12-29 16:22:57
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)


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吸光度极高,和有絮状沉淀之间有无关联现在还不好说,
用0.1mol/lNaOH溶解,并准确定容到50ml。然后取酪蛋白溶解也1ml,加4ml双缩脲试剂,室温下反应30min,在540nm下测定吸光值,并与标准曲线比对,计算酪蛋白含量。
取酪蛋白溶解也1ml,加4ml双缩脲试剂,室温下反应30min,测定酪蛋白溶液PH是多少?
7楼2011-12-29 16:32:12
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 留级生2005 at 2011-12-29 16:32:12:
吸光度极高,和有絮状沉淀之间有无关联现在还不好说,
用0.1mol/lNaOH溶解,并准确定容到50ml。然后取酪蛋白溶解也1ml,加4ml双缩脲试剂,室温下反应30min,在540nm下测定吸光值,并与标准曲线比对,计算酪蛋白含 ...

取酪蛋白溶液1ml,加4ml双缩脲试剂,并下其中加入4ml双缩脲试剂,室温下反应30min,在540nm下测定吸光值,并与标准曲线比对。酪蛋白的溶液的pH值没有测。
8楼2011-12-29 16:58:13
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)


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建议你先测一下ph,再说,
再把标准曲线的制作说一下,
9楼2011-12-29 17:03:12
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

标准曲线
准确称取1g酪蛋白,以0.1mol/lNaOH溶液溶解,然后定容到100ml,配制成10mg/ml标准液备用。
分别去酪蛋白标准液0.0、0.2、0.4、0.8、1ml于试管中,不足1ml者用蒸馏水补齐至1ml,然后各试管加入4ml双缩脲试剂,混匀,室温下反应30min,在540nm下测定吸光值。以酪蛋白量为横坐标,吸光值为纵坐标。作标准曲线。
10楼2011-12-29 17:19:10
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