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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » BCA蛋白浓度测定标准品曲线的问题。
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)

[求助] BCA蛋白浓度测定标准品曲线的问题。

求助
做ELISA及BCA蛋白浓度测定的时候都需要做标准曲线，想问应该选线性还是多项式。选择线性后测出的R方值是0.9843，选择多项式后R方值是大于0.99的。0.9843这个值是不是不行？两个公式算出的样品浓度差别很大是怎么回事啊？应该选哪个啊？
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1楼2012-12-13 12:38:27
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做一个bca就好了，不明白为啥还要做elisa啊？bca的R方值要大于0.99的，加样的时候仔细点能做到的
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加油
2楼2012-12-13 13:06:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tianhui725: 金币+2, ★有帮助 2012-12-13 16:29:29
一般做定蛋白的标准曲线都有个问题，就是蛋白浓度高时曲线向下弯曲，所以用直线拟合的话R2要小一点。用多项拟合往往可以得到更完美的拟合，R值更接近1，所以计算出的浓度也更准确。不过，这两种拟合计算出来的值不应该相差很多。
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3楼2012-12-13 14:39:21
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2012-12-13 13:06:23
做一个bca就好了，不明白为啥还要做elisa啊？bca的R方值要大于0.99的，加样的时候仔细点能做到的

做ELISA的时候也要做标准曲线的。我说的是两个实验。
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4楼2012-12-13 16:28:03
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-13 14:39:21
一般做定蛋白的标准曲线都有个问题，就是蛋白浓度高时曲线向下弯曲，所以用直线拟合的话R2要小一点。用多项拟合往往可以得到更完美的拟合，R值更接近1，所以计算出的浓度也更准确。不过，这两种拟合计算出来的值不应 ...

能不能去掉一个值？选择线性后，去掉其中一个偏离比较大的值，就大于0.99了。
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5楼2012-12-13 16:29:22
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-13 14:39:21
一般做定蛋白的标准曲线都有个问题，就是蛋白浓度高时曲线向下弯曲，所以用直线拟合的话R2要小一点。用多项拟合往往可以得到更完美的拟合，R值更接近1，所以计算出的浓度也更准确。不过，这两种拟合计算出来的值不应 ...

我用两种方法算出来差得比较多。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-12-13 20:58:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by tianhui725 at 2012-12-13 20:58:13
我用两种方法算出来差得比较多。
...

如果测试的蛋白样品的浓度在曲线的中间部分，应该相差不多。如果样品稀释得不合适，位于曲线两端，可能差别有些大。
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7楼2012-12-14 07:55:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
tianhui725: 金币+1, ★有帮助, 我把一瓶细胞裂解了，提取蛋白，测出来的蛋白浓度一般都大于最大值。 2012-12-15 13:54:16
引用回帖:
5楼: Originally posted by tianhui725 at 2012-12-13 16:29:22
能不能去掉一个值？选择线性后，去掉其中一个偏离比较大的值，就大于0.99了。...

这么做可以的。标准曲线有高浓度是希望测定样品有较广浓度范围。如果你通常的样品根本用不到最高浓度的，可以去掉。
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8楼2012-12-14 08:01:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-14 08:01:13
这么做可以的。标准曲线有高浓度是希望测定样品有较广浓度范围。如果你通常的样品根本用不到最高浓度的，可以去掉。...

浓度高的样品没有关系，一般都是稀释到合适浓度测的。
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9楼2012-12-15 14:17:58
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-15 14:17:58
浓度高的样品没有关系，一般都是稀释到合适浓度测的。...

我是说偏离比较大，不是说浓度比较高的值。能去掉嘛？
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10楼2012-12-17 18:10:26
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