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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双缩脲法测蛋白含量标准曲线绘制中出现的问题
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 双缩脲法测蛋白含量标准曲线绘制中出现的问题

以双缩脲法测定蛋白含量，在绘制标准曲线时，1ml标液与4ml双缩脲试剂反应显色30min后测定吸光度值，为何吸光度值总在0.2以下？ 且反应液不呈紫红色而是由蓝色的由淡黄色的？请各位大侠指示，谢谢！
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1楼 2012-07-05 17:05:44
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-05 18:38:35
是不是试剂存在问题呀，还有蛋白会不会变性了

蛋白肯定是没有变性的，而双缩尿试剂是按照标准配制的，1.5克硫酸铜和6.0克酒石酸钾钠溶于500ml蒸馏水，在搅拌下加入300ml 10%氢氧化钠，用水定容至1000ml。现在就是不知道问题出在哪里了。。。
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13楼2012-07-05 20:44:48
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-06 08:44:28
那楼主可以换个方法测定的，我们实验室一般采用的考马斯亮蓝法测定的

其实，蛋白含量测定方法很多，我是以双缩脲法测定谷胱甘肽含量的，反正都是基于2个肽键的反应嘛，但是结果很不好。
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16楼2012-07-06 15:57:32
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by biomater at 2012-07-06 10:15:50
0.2以上还是很容易的啊，我测试0.3以上的数据都有啊！颜色是很蓝很蓝，有点紫色的样子，不显黄色！
我用的是总蛋白测定试剂试剂盒。
显色反应在37℃水浴10min。

双缩脲法测定蛋白的含量范围是1--10mg嘛，但是我以8mg、10mg谷胱甘肽标样测定时，吸光度值也不超过0.2的，就是不知道原因。

PS：我是以双缩脲法测定蛋白含量的原理来测定谷胱甘肽含量的
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17楼2012-07-06 16:02:11
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by biomater at 2012-07-06 18:01:16
波长多少？540nm？不会啊。。。这个量应该会出现0.3以上的

嗯，540nm
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19楼2012-07-07 12:09:46
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