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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)


[交流] 双缩脲法测蛋白含量标准曲线绘制中出现的问题

以双缩脲法测定蛋白含量,在绘制标准曲线时,1ml标液与4ml双缩脲试剂反应显色30min后测定吸光度值,为何吸光度值总在0.2以下? 且反应液不呈紫红色而是由蓝色的由淡黄色的?请各位大侠指示,谢谢!
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yuli121121

铜虫 (初入文坛)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
在做实验过程中,本人也遇到这样的问题,跪求楼主指点最后是怎么解决的。。。不胜感激
24楼2014-10-17 09:48:29
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
楼主真好!
4楼2012-07-05 18:11:38
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userhung

禁虫 (文学泰斗)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
???~~~~~~~~~~~~~~~~~
5楼2012-07-05 18:17:28
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捡金小儿

新虫 (著名写手)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
添人气的!
11楼2012-07-05 18:34:32
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wqj1988926

金虫 (正式写手)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
是不是试剂存在问题呀,还有蛋白会不会变性了
12楼2012-07-05 18:38:35
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)


引用回帖:
12楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-05 18:38:35
是不是试剂存在问题呀,还有蛋白会不会变性了

蛋白肯定是没有变性的,而双缩尿试剂是按照标准配制的,1.5克硫酸铜和6.0克酒石酸钾钠溶于500ml蒸馏水,在搅拌下加入300ml 10%氢氧化钠,用水定容至1000ml。现在就是不知道问题出在哪里了。。。
13楼2012-07-05 20:44:48
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wqj1988926

金虫 (正式写手)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
那楼主可以换个方法测定的,我们实验室一般采用的考马斯亮蓝法测定的
14楼2012-07-06 08:44:28
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biomater

银虫 (著名写手)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
0.2以上还是很容易的啊,我测试0.3以上的数据都有啊!颜色是很蓝很蓝,有点紫色的样子,不显黄色!
我用的是总蛋白测定试剂试剂盒。
显色反应在37℃水浴10min。
15楼2012-07-06 10:15:50
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)


引用回帖:
14楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-06 08:44:28
那楼主可以换个方法测定的,我们实验室一般采用的考马斯亮蓝法测定的

其实,蛋白含量测定方法很多,我是以双缩脲法测定谷胱甘肽含量的,反正都是基于2个肽键的反应嘛,但是结果很不好。
16楼2012-07-06 15:57:32
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by biomater at 2012-07-06 10:15:50
0.2以上还是很容易的啊,我测试0.3以上的数据都有啊!颜色是很蓝很蓝,有点紫色的样子,不显黄色!
我用的是总蛋白测定试剂试剂盒。
显色反应在37℃水浴10min。

双缩脲法测定蛋白的含量范围是1--10mg嘛,但是我以8mg、10mg谷胱甘肽标样测定时,吸光度值也不超过0.2的,就是不知道原因。

PS:我是以双缩脲法测定蛋白含量的原理来测定谷胱甘肽含量的
17楼2012-07-06 16:02:11
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biomater

银虫 (著名写手)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
波长多少?540nm?不会啊。。。这个量应该会出现0.3以上的

[ Last edited by biomater on 2012-7-6 at 18:04 ]
18楼2012-07-06 18:01:16
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)


引用回帖:
18楼: Originally posted by biomater at 2012-07-06 18:01:16
波长多少?540nm?不会啊。。。这个量应该会出现0.3以上的

嗯,540nm
19楼2012-07-07 12:09:46
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张枫12345678

新虫 (小有名气)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
有没有正确的标准曲线啊?急求
21楼2013-05-23 10:32:09
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jullo

新虫 (初入文坛)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
我的也有這個問題
22楼2013-12-16 15:19:17
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jullo

新虫 (初入文坛)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
我也是遇到這個問題,只不過我之前配製時還有吸光值
怎麼重配試劑後,怎麼反應都到達不到
試劑都有開新的藥了
23楼2013-12-17 00:55:25
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xipha

木虫 (正式写手)



gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
这个氢氧化钠溶液要新配. 楼主的氢氧化钠是不是旧的.
25楼2014-10-18 00:13:38
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a877745785

新虫 (初入文坛)


2333333

[ 发自小木虫客户端 ]
26楼2014-10-18 00:21:58
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silvial0308

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
想问一下楼主,药典中的双缩脲配制方法跟你这个不一样,双缩脲的配制会不会有影响?而且你的标准溶液是用什么稀释的,是水还是0.05mol/l氢氧化钠?
27楼2015-01-19 14:57:19
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silvial0308

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主,我也查阅了一些资料,双缩脲试剂的配制一般都是用你的这个方法,但是药典上的方法跟你的不太一样,会不会有影响?而且你的标准溶液时用什么稀释的,是水还是0.05mol/l的氢氧化钠溶液
28楼2015-01-19 15:01:35
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cilinxue2楼
2012-07-05 17:33   回复  
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cilinxue3楼
2012-07-05 17:33   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
userhung6楼
2012-07-05 18:17   回复  
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啄虫鸟7楼
2012-07-05 18:28   回复  
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yaoyao1458楼
2012-07-05 18:28   回复  
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yaoyao1459楼
2012-07-05 18:28   回复  
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liang888710楼
2012-07-05 18:30   回复  
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2012-07-07 17:44   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
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