| 查看: 3028 | 回复: 19 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
Western Blot出现问题 已有1人参与
|
|||
|
最近Western blot做不出结果，希望大家多多指教 目的蛋白大小20kD左右，跑SDS可以看到，转膜后也可以看到，但是ECL显色后没有条带，只有白的亮的一片，而且也不清楚这些亮的一片到底是化学发光还是其他什么东西，各位高手有没有遇到这种情况，希望能给些好的建议 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
jl860822» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有130人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题
已经有9人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- western blot的问题
已经有9人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- Western blot中出现的问题-求高手指点
已经有17人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 新手求助western blot
已经有22人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】western blot
已经有35人回复
- 【求助/交流】有关western-blot的一些问题
已经有18人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
10楼2012-07-10 08:41:01
jacky1985310
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 22
- 红花: 1
- 帖子: 87
- 在线: 20.6小时
- 虫号: 543295
- 注册: 2008-04-10
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励交流经验 2012-07-06 13:48:17
jl860822: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 22:12:22
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励交流经验 2012-07-06 13:48:17
jl860822: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 22:12:22
|
不知道你所谓的转膜后也可以看到是什么意思？是通过CBB外其他染色看的吗？ 首先确认一下自己的ECL化学发光操作步骤是否正确。ECL混合后，膜孵育的时间是多久？因为ECL发光强度是一个峰值曲线，过早或过完曝光都不合适。曝光时间可以控制在5-30min之间（排除膜孵育的5min）。 然后请问你是否将光圈全开，曝光时间是多久？ 楼主应该是positive成像的吧？即背景是黑色，目的条带为白色。 如果是这样的话，全亮的区域可能有目标条带，可能是由于浓度过高或者曝光时间过久造成的。我就遇到过浓度过高的情况，一块白，而且ECL之后条带部位都有明显的棕黄烧焦的颜色。 |
2楼2012-07-06 12:17:04
3楼2012-07-09 10:57:10
4楼2012-07-09 11:03:37
