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sanshi405

金虫 (小有名气)

[求助] 构建了个基因的表达载体,发现有一个氨基酸发生突变已有1人参与

构建了个基因的表达载体,发现有一个氨基酸发生突变,怎样才能知道这个氨基酸起没起作用啊?一定要重新构建吗?求指点!
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504775490

金虫 (知名作家)

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有突变可能是测序的问题,可以要求公司再重测一次,真是突变的话可以设计引物突变回来,氨基酸突变可能会蛋白质有所影响,蛋白质这个东西还是比较复杂的,实在不行就重新构吧!个人意见,仅供参考!
8楼2012-06-30 13:11:43
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547star

木虫 (著名写手)

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★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-28 16:01:21
BLASTP找各种相似序列,比较该位置是否有出新突变后的氨基酸的序列;分析该位置氨基酸对酶结构和催化起什么作用;分析突变前后氨基酸的性质差异,最后预测突变后对酶结构和催化有什么影响。
为什么
2楼2012-06-28 15:20:33
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sk_yb

新虫 (小有名气)

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不能完全确定,只能预测。还是重新构建比较省事
3楼2012-06-28 15:30:17
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)

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★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-28 16:01:33
发生突变不一定是坏事,我觉得可以继续往下做,但同时也要重新构建序列完全正确的载体,然后和突变的进行对比,说不定会有好的结果呢。
4楼2012-06-28 15:44:18
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十二1130

银虫 (小有名气)

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如果突变后氨基酸没有改变的话,可以继续实验,但是突变位点改变了氨基酸类型,那就要重新构建了。
5楼2012-06-28 23:18:26
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lyweichen

铁虫 (小有名气)

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有突变也可能是测序的问题,重复测序验证,还有可能是你模板有问题哦。比较突变后的氨基酸与突变前的性质,如果相同,也没有必要吧。当然最好的是重新构建。
6楼2012-06-28 23:44:20
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easonyshen

银虫 (小有名气)

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重新测序以确定突变。 然后再使用定点突变手段将位点变回来。
蛋白质工程师:荧光蛋白开发
7楼2012-06-30 06:33:35
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

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强烈建议重新构建!
既然你都已经构建好了,重新构建也很快。大不了做定点突变回去好了。
9楼2012-07-01 11:35:48
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

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找出原因,重新构建吧,这样应该比较保险。
10楼2012-07-01 13:47:48
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