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huntergum

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE跑成这样是什么原因?

我做的是蛋白组学,两边的是marker,marker正常的话是7条带。浓缩胶已经去掉了。
请问这种结果是什么原因造成的?
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wenqian0216

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
配胶过程有问题吧或者胶浓度不合适
2楼2012-06-21 10:40:20
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
中间的样品看着很模糊,加上marker只有两天带,估计是煮样时间太长了;要么就是胶的浓度太稀了。不过第一个可能性比较大~
3楼2012-06-21 14:38:51
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-22 13:34:25
你的分离胶肯定有问题,连MARK都这样,肯定是胶的问题,当然不排除你跑过了,样品全出来了。其次你的样品加热时间不够,跑样之前应该离心,取上清跑样,盐浓度高,或者有尿素都会导致样品很拖。
4楼2012-06-21 15:36:14
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huntergum

新虫 (初入文坛)

我就是奇怪为什么marker只有两条带,蛋白也堆在下半部分。是胶的原因,但是能具体点吗?
5楼2012-06-21 16:02:42
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶浓度不对,或者是你跑过了!
6楼2012-06-21 21:52:51
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chunqizzm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 分析的很全面,很热心哦 2012-06-22 13:35:15
你的Marker的分子量范围是不是(116-14KDa)啊?是的话,你的目的蛋白分子量又是多少?
我和上面的看法是一样的,两种可能(第一种可能性很大):
1.你跑过了。你跑胶的时候有没有注意指示剂(溴酚蓝),一般只要根据你的目的蛋白分子量范围和Maker又是合适的(116-14KDa),那么最好是让指示剂跑到胶的底部你就应该停止电泳了(140V恒压1h内一般都够了);
2.选用的胶浓度不对,根据你的图来看可能性不大而且原因在教科书上都有就不解释了。

最后,有个请求,麻烦LZ等问题解决后上来回复一下,让以后的虫友少走些弯路。先谢谢了!
7楼2012-06-22 08:46:46
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 很热心哦 2012-06-22 13:35:44
下面明显是溴酚蓝带,胶跑过了的说法应该不成立。

蛋白主要分布在下半部分,说明你的蛋白比较小,但上样量太大,看不清。

Marker只有两条带,而且不象没有分开的样子,确实很诡异。

建议更换制胶缓冲液,更换Marker再试一试。
8楼2012-06-22 10:05:12
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chunqizzm

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by sayaya at 2012-06-22 10:05:12
下面明显是溴酚蓝带,胶跑过了的说法应该不成立。

蛋白主要分布在下半部分,说明你的蛋白比较小,但上样量太大,看不清。

Marker只有两条带,而且不象没有分开的样子,确实很诡异。

建议更换制胶缓冲液,更 ...

不多说LZ再跑一次就知道了。
9楼2012-06-22 14:50:26
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lizhijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

Marker降解了有木有?
海上生明月,天涯共此时!
10楼2013-06-02 21:31:03
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