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xgal蓝白斑实验遇到问题
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我想验证一段序列是否具有启动子活性，于是改造了pET28a，在多克隆位点处加上一段lacZα做报告基因，测序正确，在用Xgal做篮斑实验是出现以下问题 1、将Xgal直接添加到LB固体培养基到平板，+IPTG不变蓝 2、将Xgal涂在平板表面，+IPTG不变蓝 3、将X-α-Gal倒平板，阴性对照（我把T7启动子切掉作为阴性对照菌）也变蓝 我的Xgal是没问题的，用pCambia1301做阳性对照划线是变蓝的。而我的lacZ片段就是从1301里面PCR出来的，经过密码子优化去除了5‘端MCS。 另外我的Xgal是用DMSO配置的，这个应该没影响吧？ 好无助啊，整了好久，先谢谢大家 |
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