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[求助]
xgal蓝白斑实验遇到问题
我想验证一段序列是否具有启动子活性,于是改造了pET28a,在多克隆位点处加上一段lacZα做报告基因,测序正确,在用Xgal做篮斑实验是出现以下问题
1、将Xgal直接添加到LB固体培养基到平板,+IPTG不变蓝
2、将Xgal涂在平板表面,+IPTG不变蓝
3、将X-α-Gal倒平板,阴性对照(我把T7启动子切掉作为阴性对照菌)也变蓝
我的Xgal是没问题的,用pCambia1301做阳性对照划线是变蓝的。而我的lacZ片段就是从1301里面PCR出来的,经过密码子优化去除了5‘端MCS。
另外我的Xgal是用DMSO配置的,这个应该没影响吧?
好无助啊,整了好久,先谢谢大家 |
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