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347239684

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE电泳

最近一直在做SDS-PAGE电泳实验,可是每次跑出来的条带都会有竖的条带出现,细胞破碎之后10000rpm/min离心30min,取上清加上样缓冲液开水煮沸10min,再离心20多分钟还是会出现纹理现象,不知道是什么原因?
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  • 2012-06-06 17:26:40, 1.83 M

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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:51:59
应该是蛋白胶的原因吧。不应该是蛋白处理上的问题。跑个标准样品试试,像BSA
2楼2012-06-06 17:46:21
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还应该是蛋白质的缘故吧。
蓝精灵
3楼2012-06-06 18:07:25
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vetzcm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:52:07
应该是细胞样品没破坏核酸的原因吧  试着超声破碎处理下细胞 再离心,煮样试试  配胶时凝胶时间要充分
4楼2012-06-06 18:31:01
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347239684

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by vetzcm at 2012-06-06 18:31:01
应该是细胞样品没破坏核酸的原因吧  试着超声破碎处理下细胞 再离心,煮样试试  配胶时凝胶时间要充分

我们实验室就是用超声破碎后离心的。
5楼2012-06-06 18:43:36
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347239684

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangbin1 at 2012-06-06 17:46:21
应该是蛋白胶的原因吧。不应该是蛋白处理上的问题。跑个标准样品试试,像BSA

我加了Marker,没有出现纹理现象,不过胶越往下面,则marker跑的不平。
6楼2012-06-06 18:45:29
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

这是有拖带现象吧
快乐奋斗,创造所有。
7楼2012-06-06 21:47:16
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zhixuec

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
347239684: 金币+5 2012-06-07 08:54:56
小丹木木: 金币+3, 很热心,很中肯的建议 2012-06-07 13:54:05
347239684: 金币+3 2012-06-10 17:01:36
看到你的图片了

Marker 没有问题说明胶没有问题

说明是你样品问题:包括上样Loading Buffer,样品处理等,

从3个方面入手:
1. 你下次试着将样品加入Loading Buffer后,煮沸时间长一点儿
2.还有就是上样量要控制低一些
3.5%的浓缩胶聚合时间久一点,至少30min
酷爱の族
8楼2012-06-06 22:38:40
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助,欢迎热心的虫虫 2012-06-07 13:54:38
看样子不是你胶的问题
那就是你样品处理的事情了
我这边做,一般啥12000转离心,1min一般就没有问题
还有煮沸以前我才煮三分钟,后来升到5min左右,就是让蛋白变性而已,没必要太久,不过久一点应该也不会出现你说的那种情况
最后一点 我觉得你该换loading buffer了 如果啥自己配制的,重新配制 以前我也出现过一个问题 最后就是buffer的原因
9楼2012-06-07 09:16:22
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sunnyseu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good! 2012-06-07 22:52:25
347239684: 金币+2 2012-06-10 17:01:18
内容已删除
10楼2012-06-07 21:22:41
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