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347239684

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE电泳

最近一直在做SDS-PAGE电泳实验，可是每次跑出来的条带都会有竖的条带出现，细胞破碎之后10000rpm/min离心30min，取上清加上样缓冲液开水煮沸10min，再离心20多分钟还是会出现纹理现象，不知道是什么原因？
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    • 2012-06-06 17:26:40, 1.83 M

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1楼 2012-06-06 17:26:44
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，欢迎热心的虫虫 2012-06-07 13:54:38
看样子不是你胶的问题
那就是你样品处理的事情了
我这边做，一般啥12000转离心，1min一般就没有问题
还有煮沸以前我才煮三分钟，后来升到5min左右，就是让蛋白变性而已，没必要太久，不过久一点应该也不会出现你说的那种情况
最后一点 我觉得你该换loading buffer了 如果啥自己配制的，重新配制 以前我也出现过一个问题 最后就是buffer的原因
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9楼2012-06-07 09:16:22
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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:51:59
应该是蛋白胶的原因吧。不应该是蛋白处理上的问题。跑个标准样品试试，像BSA
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2楼2012-06-06 17:46:21
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还应该是蛋白质的缘故吧。
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蓝精灵
3楼2012-06-06 18:07:25
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vetzcm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:52:07
应该是细胞样品没破坏核酸的原因吧  试着超声破碎处理下细胞 再离心，煮样试试  配胶时凝胶时间要充分
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4楼2012-06-06 18:31:01
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