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bressze

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒中插入21bp片段突变

我现在需要在原来质粒的基础上插入 21bp的片段,根据上游和下游的碱基分别有21个bp互补。所以引物一共是63bp,合成了互补的一对引物,Tm值在72℃。现在是想PCR得到突变质粒后DPN1酶切。结果PCR后取5ul电泳总是没有条带,只有引物二聚体出现。我的酶试过 ex taq ,la taq 及普通的taq结果都一样。

谢谢大家的帮忙,希望早点解决实验问题
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 18:57:52
21bp  ?!!   这个不大可行吧,我记得查过三个BP以上就难了,而且我也在做突变,就三个突变就各种二聚体了。。。
像你说这种引物应该只能P出二聚体了吧。。。。。因为引物的互补太强了,楼主看能不能把质粒切开,然后合一个引物往上加,之后再连上呢
我会绕一个圈,走回到实验室
2楼2012-06-06 14:40:10
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3楼2020-11-16 09:35:10
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