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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒中插入21bp片段突变
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bressze

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒中插入21bp片段突变

我现在需要在原来质粒的基础上插入 21bp的片段，根据上游和下游的碱基分别有21个bp互补。所以引物一共是63bp，合成了互补的一对引物，Tm值在72℃。现在是想PCR得到突变质粒后DPN1酶切。结果PCR后取5ul电泳总是没有条带，只有引物二聚体出现。我的酶试过 ex taq ,la taq 及普通的taq结果都一样。

谢谢大家的帮忙，希望早点解决实验问题
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加油生活哦
1楼 2012-06-06 13:27:12
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lzk234

禁虫
本帖内容被屏蔽
3楼2020-11-16 09:35:10
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 18:57:52
21bp  ?!!   这个不大可行吧，我记得查过三个BP以上就难了，而且我也在做突变，就三个突变就各种二聚体了。。。
像你说这种引物应该只能P出二聚体了吧。。。。。因为引物的互补太强了，楼主看能不能把质粒切开，然后合一个引物往上加，之后再连上呢
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2012-06-06 14:40:10
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