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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变PCR 用DpnI法
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)

[求助] 定点突变PCR 用DpnI法

童鞋们有没有用DpnI法做过定点突变PCR的啊？请问一下以质粒作为模版，设计的引物必须反向互补吗？只有一部分重叠互补可以吗？
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1楼 2012-06-05 21:48:28
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxlxyc: 金币+1 2012-06-06 08:57:19
做过，我们的引物是包括你的突变位点，一共60个碱基，反向互补啊。
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2楼2012-06-05 23:37:04
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)
完全反向互补吗？如果只overlap一部分不可以吗？
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3楼2012-06-06 08:56:36
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lanjb1013 at 2012-06-05 23:37:04
做过，我们的引物是包括你的突变位点，一共60个碱基，反向互补啊。

完全反向互补吗？如果只overlap一部分不可以吗？
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4楼2012-06-06 08:57:05
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匿名

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5楼2012-06-17 07:33:07
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匿名

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6楼2012-06-17 07:33:47
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soholj

至尊木虫 (著名写手)
有这个方法的原理吗？
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7楼2012-06-29 12:57:54
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soholj

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 逐玉 at 2012-06-17 07:33:47
Tm值大于78度

有这个方法的原理吗?
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8楼2012-06-29 12:58:28
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匿名

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9楼2012-06-30 16:52:10
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jasminezhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 逐玉 at 2012-06-30 16:52:10
搜索一下QuikChange II Site-Directed Mutagenesis Kit的说明书，上面说的还算详细。中文的也有：碧云天的突变试剂盒说明书。很多的，需要的话，可以消息我。

我想请教一下用这个试剂盒做完之后进行转化，得到的克隆体对其进行挑取，提质粒，那么再送去测序之前需要对其进行检测吗？还是直接送去测序？？谢谢
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10楼2013-01-07 16:31:41
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