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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达载体构建，测序不成功
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达载体构建，测序不成功

郁闷死了，构建原核表达载体，提质粒电泳检测是大于两千，又用目的基因的引物做pcr检测，条带正确，然后送测序，告诉我可能是空载。。。。。。。
要是空载的话我pcr还能有目的条带吗？这个构建了好久了，一直没成功，快疯了
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1楼 2012-06-05 18:49:02
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-06 13:46:44
PCR真不好说的，影响因素太多，出来带不一定就是。测序峰套叠的多了点，但是也能看出每个位置有一个峰高很多。这种情况，我一般认为是质粒不纯或出现非特异性，可能是菌不纯或质粒提取被污染，建议划线纯化，直接挑菌送测序。
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为什么
6楼2012-06-06 08:54:42
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 芥末猫 at 2012-06-06 10:03:07
你好，你的意思是用我提的质粒转化大肠杆菌划线吗？...

如果重新连接有困难,就拿质粒再转化,挑几个单菌落培养,保藏,提质粒跑电泳看是否跟预期大小相似,是的话,拿一个质粒或保藏的菌种送测序.
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为什么
12楼2012-06-06 11:33:31
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