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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间
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auau96

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间 已有2人参与

大家好  我现在在做酿酒酵母基因敲除  利用左右同源臂各390bp和540bp  因为本身菌株遗传背景不清楚  MARKER基因既不是抗性基因和也不是缺陷型基因     用能表达的酶基因做筛选标记   不知各位前辈是否有此类实验经验来敲除目的基因   
实验顺利大概需多少时间能完成
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1楼 2012-06-05 11:03:28
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by auau96 at 2012-06-06 21:13:34
用的是纤维素酶基因  但是只用了它的CDS序列  想利用被敲基因ORF上下游做启动子和终止子  想达到及表达标记基因 也替换被敲基因的ORF

可能这样的设计有问题
不知前辈有何高见  请赐教  谢谢...

想问一下，怎样确定这个外源基因在酵母中有活性呢？
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姥姥不疼，舅舅不爱
16楼2012-12-04 08:25:31
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by iaminxanadu at 2012-06-07 08:38:28
纤维素酶基因复杂。保证有活性、且能胞外表达（分泌或细胞表面展示）的前提下，可以用纤维素为唯一碳源筛选。

想在敲除一基因同时，构建纤维素利用的工程菌想法可行。但涉及到很多基础的问题。如果是这样思路的话 ...

有什么实验方法能确定蛋白有活性呢？
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
17楼2012-12-04 08:27:33
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