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auau96

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间已有2人参与

大家好  我现在在做酿酒酵母基因敲除  利用左右同源臂各390bp和540bp  因为本身菌株遗传背景不清楚  MARKER基因既不是抗性基因和也不是缺陷型基因     用能表达的酶基因做筛选标记   不知各位前辈是否有此类实验经验来敲除目的基因   
实验顺利大概需多少时间能完成
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by auau96 at 2012-06-06 21:13:34
用的是纤维素酶基因  但是只用了它的CDS序列  想利用被敲基因ORF上下游做启动子和终止子  想达到及表达标记基因 也替换被敲基因的ORF

可能这样的设计有问题
不知前辈有何高见  请赐教  谢谢...

想问一下,怎样确定这个外源基因在酵母中有活性呢?
姥姥不疼,舅舅不爱
16楼2012-12-04 08:25:31
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)


rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 21:29:42
不知酶基因是什么,选择不好效率太差了。你可以用一些显性的遗传标记啊,比如抗G418的基因作为筛选标记。这样的话,把同源序列克隆到标记上下游,酶切一下,一次就筛选出来。
2楼2012-06-05 13:41:30
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)


rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 21:29:36
是不是采用Cre/loxP系统?PUG6系统质粒,G418选择标记?
这就是同源重组原理,应该在3-6个月可以搞定,我之前有搞过这个,用的是Cre/loxP系统
3楼2012-06-05 14:57:55
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-23 18:03:00
是不是采用Cre/loxP系统?PUG6系统质粒,G418选择标记?
这就是同源重组原理,应该在3-6个月可以搞定,我之前有搞过这个,用的是Cre/loxP系统
4楼2012-06-05 14:58:08
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