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btx362237729

金虫 (正式写手)

[交流] 神奇的质粒提取，花儿一样神奇的单酶切跑胶！

引言：本人小硕，开始做构建，从实验组其他同学那里要来pcDNA3.1(+)做真核表达载体，一开始酶切就遇到了问题，特来请教！感谢大家指教！

下图为用同学给的pcDNA3.1(+)转化DH5α之后，手提质粒、试剂盒提质粒、3种酶单酶切试剂盒提取质粒的1%琼脂糖电泳图

M: takara的DL 10,000 Marker 1. BamHⅠ单酶切 2. HindⅢ单酶切 3. XhoⅠ单酶切
4. takara试剂盒提取的质粒 5. 碱裂解法酚氯仿抽提的质粒 6. 同学给的质粒pcDNA3.1(+)

单酶切条件为：17ul试剂盒提取的质粒+1ul酶+2ul K Buffer 共20ul体系，37℃水浴4小时

单酶切都切成花朵了，哈哈，不知道有人遇到这个问题没！！！
请教大家这到底是怎么回事？好像同学给的质粒跑胶条带也有问题，怎么两条亮带呢。。。应该不是mRNA，在冰箱放很久了。

下图是试剂盒提取的质粒和手提质粒pcDNA3.1(+)

123为试剂盒提取，456为碱裂解法酚氯仿抽提
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1楼 2012-05-31 22:36:53
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淘气维尼89

木虫 (小有名气)
★ ★
btx362237729(金币+1): 谢谢参与
btx362237729: 金币+1 2012-06-01 10:41:30
你酶切加的质粒太多了吧，第二张的质粒电泳图还不错，就是浓度太高了。酶切位点是不是有问题，质粒应该是空质粒吧？
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18楼2012-06-01 09:47:39
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