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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 短基因片段合成的相关问题求助
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yijunliu

银虫 (初入文坛)

[求助] 短基因片段合成的相关问题求助

各位虫友，大家好。最近在做一个基因，由于没有模板，只能去生物公司合成。我的基因片段一共69bp，加上两端的酶切位点一共是81bp。咨询过生物公司的负责人，他们说如果按照一般合成基因的程序，先把目的基因合成到质粒里面，把质粒寄给我们，我们再进行双酶切和胶回收基因酶切片段，再与自己的质粒酶连。对于我这样的小片段基因不容易做。他们提出建议：这么短的基因，可以直接合成两条长链，然后寄给我们，由我们自己退火，这样的话退火后直接和酶切好的自己的质粒连接就行了。
    我想问问大家，这样做出来的基因可以直接当做是已经双酶切过的基因与我们自己已双酶切过的质粒酶连吗？还有，自己退火的话，温度，时间等条件应该怎么判定呢。
    第一次接触这方面，请大家多多指导！！十分感谢啊！！！
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1楼 2012-05-31 15:07:08
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yijunliu

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by bst5 at 2012-06-05 11:17:46
公司说的没错，直接合成两条链，然后退火就会成一条链，最后直接和载体连接，没问题的。退火的时候需要一个缓冲液（100mM NaCl ，50mM Hepes）退火条件：94度4min，70度10min，37度，20min。-20度保存。我特意查了一 ...

非常感谢啊！
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5楼2012-06-05 18:10:42
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qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yijunliu: 金币+2 2012-06-05 18:12:00
直接构建到你的载体不就得了，这个小回收不好做的
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2楼2012-05-31 20:10:41
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yijunliu

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-05-31 20:10:41
直接构建到你的载体不就得了，这个小回收不好做的

嗯，是这样的，我是要构建一个重组质粒，该片段是其中一段，不是直接表达该片段的。
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3楼2012-06-03 11:17:10
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yijunliu: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-06-05 18:11:47
公司说的没错，直接合成两条链，然后退火就会成一条链，最后直接和载体连接，没问题的。退火的时候需要一个缓冲液（100mM NaCl ，50mM Hepes）退火条件：94度4min，70度10min，37度，20min。-20度保存。我特意查了一下实验记录，呵呵，祝好运！
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yijunliu
4楼2012-06-05 11:17:46
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