应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 短基因片段合成的相关问题求助
61/1返回列表
查看: 1712  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yijunliu

银虫 (初入文坛)

[求助] 短基因片段合成的相关问题求助

各位虫友，大家好。最近在做一个基因，由于没有模板，只能去生物公司合成。我的基因片段一共69bp，加上两端的酶切位点一共是81bp。咨询过生物公司的负责人，他们说如果按照一般合成基因的程序，先把目的基因合成到质粒里面，把质粒寄给我们，我们再进行双酶切和胶回收基因酶切片段，再与自己的质粒酶连。对于我这样的小片段基因不容易做。他们提出建议：这么短的基因，可以直接合成两条长链，然后寄给我们，由我们自己退火，这样的话退火后直接和酶切好的自己的质粒连接就行了。
    我想问问大家，这样做出来的基因可以直接当做是已经双酶切过的基因与我们自己已双酶切过的质粒酶连吗？还有，自己退火的话，温度，时间等条件应该怎么判定呢。
    第一次接触这方面，请大家多多指导！！十分感谢啊！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

重组的景区

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-31 15:07:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yijunliu: 金币+2 2012-06-05 18:12:00
直接构建到你的载体不就得了，这个小回收不好做的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-05-31 20:10:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yijunliu

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-05-31 20:10:41
直接构建到你的载体不就得了，这个小回收不好做的

嗯，是这样的，我是要构建一个重组质粒，该片段是其中一段，不是直接表达该片段的。
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-03 11:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yijunliu: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-06-05 18:11:47
公司说的没错，直接合成两条链，然后退火就会成一条链，最后直接和载体连接，没问题的。退火的时候需要一个缓冲液（100mM NaCl ，50mM Hepes）退火条件：94度4min，70度10min，37度，20min。-20度保存。我特意查了一下实验记录，呵呵，祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yijunliu
4楼2012-06-05 11:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yijunliu

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by bst5 at 2012-06-05 11:17:46
公司说的没错，直接合成两条链，然后退火就会成一条链，最后直接和载体连接，没问题的。退火的时候需要一个缓冲液（100mM NaCl ，50mM Hepes）退火条件：94度4min，70度10min，37度，20min。-20度保存。我特意查了一 ...

非常感谢啊！
回复此楼
5楼2012-06-05 18:10:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suanniunaizz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yijunliu at 2012-06-05 18:10:42
非常感谢啊！...

这个退火条件是适合所有的小片段合成吗？我也需要合成一段小基因片段，一端是粘性末端，一端为平末端，咨询了很多公司都说做不了
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-13 15:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yijunliu 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭