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mark870625

铁虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR 低浓度质粒扩增不出来 楼主要疯了

荧光定量PCR,用的TAKARA的SYBGREEN体系,相对定量,浓度梯度为6次方到0次方.在实验结果中,6-3次方的质粒的溶解曲线中间隔很均匀,但是到了后面就什么也没有了,就和NTC一样....我的SLOPE=-5.07

还有请问,是不是把质粒作到最低浓度,得出的标准曲线的斜率可能会向-3.2靠近呢?比如说从10到0次方的浓度梯度,只做10到5次方质粒的斜率和做5到0次方的斜率会差很远吗?

我觉得这两条线的斜率应该是一样的才对,但是为什么实验室师姐做出来的会差异很大呢?而且她建议我每次定量都尽量做到最低的质粒浓度.

[ Last edited by 西瓜 on 2012-5-26 at 10:19 ]
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NO SENCE
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decloud

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问问实验室别人做sybr时候的起始质粒浓度。还有你确定稀释的时候混匀了, 一般做效率,5个梯度就够了。。。还有你primer的浓度。。。
适则存乙,劳则忙乙,
3楼2012-05-27 13:44:44
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mark870625

铁虫 (初入文坛)

有木有同学会阿.....急求.....
NO SENCE
2楼2012-05-26 14:15:00
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