应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达中目的蛋白不明确
51/1返回列表
查看: 1709  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

麦堂straw

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达中目的蛋白不明确

初做蛋白表达，目的片段确定插入载体测序正确，用的BL21为宿主菌，尝试了各种条件，比如IPTG浓度有0.1mM、0.5mM、1mM，温度有37，30，25，蛋白电泳结果分析均无明显目的条带，虽在Marker相近位置处有条带表达，但未诱导前也有该条带的表达，且诱导后条带浓度的增加量并不是十分明显，所以很纠结到底是不是想要的目的条带。
请问各位大虾，碰到这种情况，要怎么办？我的蛋白带了His标签，如果我做镍柱纯化的话可否验证条带的正确性，我怕如果那条条带就算是目的条带的话，表达量太少我一纯化损失太多也看不到，求助我该如何处理？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
1楼 2012-05-25 22:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

radium4046

铁虫 (初入文坛)
western blot检测一下就行了……
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-28 15:41:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 专家考核, 辛苦哈 2012-05-26 10:54:49
麦堂straw: 金币+1, 谢谢应助 2012-05-28 09:06:19
首先必须确认外源基因已经连接到载体且读码框正确，在此基础上如果没有表达，转其他宿主试试。
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-26 08:20:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麦堂straw

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-05-26 08:20:48
首先必须确认外源基因已经连接到载体且读码框正确，在此基础上如果没有表达，转其他宿主试试。

谢谢回复。
已确认外源基因转入载体且测序正确，现在不确定的是外源基因有没有表达，因为条带不明显，像是又不像是目的条带，所以想通过纯化看一下，就是怕本来表达量少再一纯化就没了，也鉴别不了到底是不是要表达的条带了。
赞一下 回复此楼
山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
3楼2012-05-26 22:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
麦堂straw: 金币+1, 谢谢应助 2012-05-28 09:06:38
本帖内容被屏蔽
4楼2012-05-27 09:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭