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麦堂straw银虫 (小有名气)
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[求助]
原核表达中目的蛋白不明确
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初做蛋白表达，目的片段确定插入载体测序正确，用的BL21为宿主菌，尝试了各种条件，比如IPTG浓度有0.1mM、0.5mM、1mM，温度有37，30，25，蛋白电泳结果分析均无明显目的条带，虽在Marker相近位置处有条带表达，但未诱导前也有该条带的表达，且诱导后条带浓度的增加量并不是十分明显，所以很纠结到底是不是想要的目的条带。 请问各位大虾，碰到这种情况，要怎么办？我的蛋白带了His标签，如果我做镍柱纯化的话可否验证条带的正确性，我怕如果那条条带就算是目的条带的话，表达量太少我一纯化损失太多也看不到，求助我该如何处理？ |
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麦堂straw
银虫 (小有名气)
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lxj341401
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2楼2012-05-26 08:20:48
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4楼2012-05-27 09:32:23
ruoshui183
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5楼2012-05-27 13:04:44
50