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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用RT-PCR检测RNAi 的干扰效果如此诡异，求高手指点
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yilanly

银虫 (初入文坛)

[交流] 用RT-PCR检测RNAi 的干扰效果如此诡异，求高手指点

请大家看图吧，我做的是shRNA，做了两次RT了，结果基本相同。很奇怪的是我的weichuli样品（即单纯的细胞培养）的表达量理论上应该是和control一样，但为什么如此低？！！！
求帮助。。。。

这三个柱状图分别是插入打乱序列的siRNA和两条理论上有抑制效果的siRNA



又加了一个仅仅是细胞培养，命名为weichuli
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1楼 2012-05-24 09:42:44
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yglky

金虫 (正式写手)
★
yilanly(金币+1): 谢谢参与
这两个siRNA序列没有抑制效率。至于空载体对照表达量为什么增加，影响因素可能很多，但是没有明确的解释机理，只能是理论推测。你可以选择换个shRNA载体试试。
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25楼2012-05-27 11:38:54
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普通回帖

yilanly

银虫 (初入文坛)
我又做了一次，用了两种转染方法，LIF2000和PEI结果更是神奇。
看下图
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2楼2012-05-24 09:51:37
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yilanly

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by neu234 at 2012-05-24 09:52:28:

谢谢！
在线等。。。
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4楼2012-05-24 09:54:44
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yilanly

银虫 (初入文坛)
没人做这方面的吗？我做的Raf-1基因的干扰。
我想知道为什么没有干扰的表达量最低。。。。
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8楼2012-05-24 10:45:30
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
yilanly(金币+1): 谢谢参与
路过的，瞅瞅！
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11楼2012-05-24 11:33:53
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yilanly

银虫 (初入文坛)
还是没人回复啊
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19楼2012-05-24 14:00:20
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xiao105

新虫 (初入文坛)
★
yilanly(金币+1): 谢谢参与
我设计了三条shRNA，同时用两条或者三条处理的为什么还没有单独一条处理的沉默效果好？
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30楼2014-11-21 23:42:30
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徐州王小健

新虫 (初入文坛)
★
yilanly(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
25楼: Originally posted by yglky at 2012-05-27 11:38:54
这两个siRNA序列没有抑制效率。至于空载体对照表达量为什么增加，影响因素可能很多，但是没有明确的解释机理，只能是理论推测。你可以选择换个shRNA载体试试。

我也遇到这个情况，未处理组与NC组相比差异很大；而且只转转染试剂组同样差异很大

发自小木虫IOS客户端
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31楼2017-09-14 20:14:44
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neu2343楼
2012-05-24 09:52   回复  
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8673929495楼
2012-05-24 10:00   回复  
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xiaohuii6楼
2012-05-24 10:35   回复  
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tangbohejin7楼
2012-05-24 10:40   回复  
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10102050759楼
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假大空10楼
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2270835412楼
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zywzhangyw13楼
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xachenxi14楼
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20091262215楼
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shihao61116楼
2012-05-24 12:39   回复  
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hr63017楼
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huijun043218楼
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lcn52020楼
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zhuyanmei22楼
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jztxiaozhou24楼
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