24小时热门版块排行榜    

查看: 6663  |  回复: 11
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] 点突变引物设计的问题

我突变了一个氨基酸,设计的引物照着说明书设计的,两条完全互补的引物,有个问题是为什么突变点两边都必须有一定长度的重叠区呢?这样的话PCR形成引物二聚体的可能性就大了啊?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 先进材料与分子模拟 【分子生物】EPI帖 有价值的生物经验贴
噬菌体库筛选 核酸方面

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Kyle0052

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有引物二聚体也没关系,在做完转化后就给筛选掉了
9楼2014-06-13 15:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 专家考核, 鼓励交流 2012-05-23 22:33:24
你说的没错,但确实是这么做的,也能做出来,有一定长度的重叠区无法保证位点突变,不要纠结引物二聚体的形成。
2楼2012-05-23 15:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good! 2012-05-23 22:34:07
设计点突变的引物应该是让中间的某个氨基酸突变吧,这样你就需要4条引物,基因全长的上下游引物以及点突变上的两条引物(一条上游一条下游),首先要用全长基因的上游引物和突变位置的下游引物扩增得到前面的序列,再用突变位置的上游引物和全长基因的下游引物扩增后面的序列,得到的这两部分片段按照1:1混合作模板,用全长基因的上下游引物扩增。因为这两段是分离的,要想得到全长,那么中间的引物肯定要一定的重叠区,才能保证延伸时得到全长。在扩增的过程中并没有中间两条引物同时加入一个反应体系中扩增的情况出现,因此也就不会出现二聚体。
3楼2012-05-23 15:32:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Diacetyl

铁虫 (初入文坛)


★ ★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-23 22:34:18
SOE法点突变过程示意

SOE法点突变过程示意

4楼2012-05-23 21:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +6 z1z2z3879 2026-03-16 8/400 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 293求调剂 +5 世界首富 2026-03-11 5/250 2026-03-17 10:16 by Sammy2
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 4/200 2026-03-16 23:52 by zbzihdhd
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
请填处理意见