| 查看: 6757 | 回复: 11 | |||||||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||||||
[交流]
点突变引物设计的问题
|
|||||||||
| 我突变了一个氨基酸，设计的引物照着说明书设计的，两条完全互补的引物，有个问题是为什么突变点两边都必须有一定长度的重叠区呢？这样的话PCR形成引物二聚体的可能性就大了啊？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 先进材料与分子模拟 | 【分子生物】EPI帖 | 有价值的生物经验贴 |
| 噬菌体库筛选 | 核酸方面 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有194人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 定点突变引物设计
已经有8人回复
- 关于引物设计的问题
已经有5人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 引物设计的问题
已经有6人回复
- 引物设计
已经有4人回复
- 做蛋白体外表达时的引物设计问题！
已经有12人回复
- 【求助/交流】两条序列只有1-2个变异位点，能设计特异引物区别出来吗？
已经有23人回复
- 【求助/交流】引物设计的 序列选择问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】定点突变引物设计问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于启动子缺失的引物设计问题
已经有4人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
【科研项目】破解电池安全密码：揭秘国内首款火灾爆炸与抑制一体化实验舱
+1/95
-
2026年武汉工程大学千人计划团队招收硕士研究生调剂
+2/50
-
上海应用技术大学招收化学、物理、材料类调剂生
+1/40
-
喀什大学环境生态修复功能材料与技术团队接收2026年调剂研究生
+1/39
-
河南工业大学化学化工学院 2026 年硕士调剂正在进行！
+1/32
-
欧盟ELI项目太赫兹小组招收太赫兹光学博士
+1/19
-
湖南工大李广利教授课题组接受化学、材料、生物、生医、计算机相关专业调剂生8-10名
+1/17
-
2026广东医科大学生物医学工程学硕、电子信息专硕接收调剂
+1/17
-
大湾区大学李红庚课题组招聘研究助理
+1/15
-
南京，真诚征女友
+1/11
-
南昌航空大学 材料学院 招材料类调剂研究生，名额多，上岸机会大
+1/11
-
香港科技大学 机器人/生物医学
+1/9
-
【上海调剂】985联合培养！别错过能送你去丹麦/交大/同济/中科院的神仙导师！
+1/9
-
082200，085606，085606
+1/8
-
太原科技大学材料科学与工程学院“03高性能轻质合金及新能源材料”学硕与专硕有缺额
+1/5
-
齐鲁工业大学 国家重点实验室-新能源、锂离子电池、材料、化学方向
+1/5
-
淮北师范大学能源科学与工程学院研究生招收调剂
+1/5
-
【调剂上岸】985联合培养！1007/1055/08/07等，不限专业，想联培的速来！
+1/4
-
差旅首选:第一次出差珠海开住宿餐饮发票实体店电子专用,保姆级教程请收好
+1/1
-
太原科技大学材料科学与工程学院学硕、专硕调剂
+1/1
★ ★ ★ ★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good！ 2012-05-23 22:34:07
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good！ 2012-05-23 22:34:07
| 设计点突变的引物应该是让中间的某个氨基酸突变吧，这样你就需要4条引物，基因全长的上下游引物以及点突变上的两条引物（一条上游一条下游），首先要用全长基因的上游引物和突变位置的下游引物扩增得到前面的序列，再用突变位置的上游引物和全长基因的下游引物扩增后面的序列，得到的这两部分片段按照1：1混合作模板，用全长基因的上下游引物扩增。因为这两段是分离的，要想得到全长，那么中间的引物肯定要一定的重叠区，才能保证延伸时得到全长。在扩增的过程中并没有中间两条引物同时加入一个反应体系中扩增的情况出现，因此也就不会出现二聚体。 |
3楼2012-05-23 15:32:08
2楼2012-05-23 15:29:12
4楼2012-05-23 21:50:26
★ ★ ★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-24 13:55:54
loveskyzhou: 金币+1, 对对，就是这个问题~ 有人说P出来的带可能会很浅 所以即便跑胶看不到也可以转化。我做的时候确实看不到，而引物二聚体却很明显，转化后确实长了单克隆，但都提不出质粒来。。。很困惑啊~ 2012-05-24 14:35:48
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-24 13:55:54
loveskyzhou: 金币+1, 对对，就是这个问题~ 有人说P出来的带可能会很浅 所以即便跑胶看不到也可以转化。我做的时候确实看不到，而引物二聚体却很明显，转化后确实长了单克隆，但都提不出质粒来。。。很困惑啊~ 2012-05-24 14:35:48
|
小猫回答的虽然对，但不是楼主问的问题。 楼主要做的是一步的点突变。用两条完全互补的引物将整个质粒pcr扩增出来。扩增得到的缺刻质粒转化至带有基因修复功能的dam+型细菌中，修复成完整的质粒。 楼主你放心做吧，没有问题的。我所做的成功率都非常高。你说的引物二聚体问题也有人做过改进 参考文献 L Zheng, U Baumann, and JL Reymond. An efficient one-step site-directed and site-saturation mutagenesis protocol. Nucl. Acids Res., 32:e115, 2004. 但一般情况下，常规方法都能满足。 |
5楼2012-05-24 13:54:28
