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在雨中

金虫 (著名写手)


[求助] ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定,为啥PCR产物竟然是2个条带?

RT,对土壤样品中的真菌菌株鉴定,除了已知某菌株PCR为单一明亮条带外,其他土壤样品的DNA提取物用ITS1和ITS4这对引物扩增在500-700bp大都有2个目标条带。。。。什么情况?
这样的PCR产物能够拿去克隆测序吗?
将500-700bp的两个条带都切胶回收,可以克隆测序吗?请高手指点。
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匿名

用户注销 (著名写手)

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10楼2013-06-12 17:11:01
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qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
在雨中: 回帖置顶 2012-05-22 09:50:30
在雨中: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢。您是高手哇 2012-05-22 09:50:42
1.不同真菌的ITS片段大小是不一样的,大小在500-750bp之间,个别在1000左右
2.土壤样品的DNA提取物用ITS1和ITS4这对引物扩增在500-750bp大都有2个目标条带是正常的,因为土壤中的真菌种类很多,所以条带会多,而且普通电泳无法区分,所以用切胶回收做克隆测序的话,也会得到很多真菌,而不是单一的,我觉得做克隆测序是可以的
2楼2012-05-21 19:09:13
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霸_霸

新虫 (初入文坛)

我也做真菌这个区扩增,有时候因为菌不纯会得到两个不同片段,大多还是一个条带,
还有就是 我想请问你个问题,我在pcr过程中对于某些真菌有时会p不出来,可能是dna提取的问题,你遇到过吗?
你dna是怎么提的?
3楼2012-06-12 14:55:17
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muchong5577

金虫 (正式写手)

能多和你们交流吗?我最近也在做这个。
4楼2012-06-12 17:33:26
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