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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR结果不正确
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lifei_dut

金虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR结果不正确

采用一对引物扩增序列重组后，用重组菌液进行PCR，希望获得相应的DNA序列。采用跟对扩引物相同的引物进行PCR实验，本来应该是570bp的条带只有200左右，不知道是什么原因？排除了药品的质量问题。
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1楼 2012-05-17 17:07:26
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一度冰火

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
嗯，
1.菌液PCR时会有很多因素影响PCR的结果，可以试下对重组菌液进行质粒提取后在进行目的片段PCR。
2.还有可能你的重组质粒构建失败。
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快来找我吧！
4楼2012-05-19 00:11:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 凌凌一直都很热心的哇 2012-05-18 15:28:38
我觉得首先还是专一性扩增的问题，引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。引物可以稍长些。
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2楼2012-05-18 10:26:51
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是引物没有设计好，可考虑重新合成引物
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好好学习
3楼2012-05-18 20:35:51
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lifei_dut: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-20 16:18:12
是不是你在挑单菌落的时候挑的太少了，我们实验室一般要挑20个左右，这样才能保证在20个里有重组成功的。你菌液PCR出来只有200左右我觉得应该是质粒，你挑的菌落都是假阳性菌落，所以我建议以后挑菌落的时候多挑一些，虽然会麻烦一些，但是可以最大程度的保障实验结果。还有我觉得感受态的质量也会对实验记过产生一定影响。
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5楼2012-05-19 09:12:56
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