24小时热门版块排行榜    

查看: 1474  |  回复: 4

lifei_dut

金虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR结果不正确

采用一对引物扩增序列重组后,用重组菌液进行PCR,希望获得相应的DNA序列。采用跟对扩引物相同的引物进行PCR实验,本来应该是570bp的条带只有200左右,不知道是什么原因?排除了药品的质量问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 凌凌一直都很热心的哇 2012-05-18 15:28:38
我觉得首先还是专一性扩增的问题,引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。引物可以稍长些。
2楼2012-05-18 10:26:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是引物没有设计好,可考虑重新合成引物
好好学习
3楼2012-05-18 20:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一度冰火

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯,
1.菌液PCR时会有很多因素影响PCR的结果,可以试下对重组菌液进行质粒提取后在进行目的片段PCR。
2.还有可能你的重组质粒构建失败。
快来找我吧!
4楼2012-05-19 00:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lifei_dut: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-20 16:18:12
是不是你在挑单菌落的时候挑的太少了,我们实验室一般要挑20个左右,这样才能保证在20个里有重组成功的。你菌液PCR出来只有200左右我觉得应该是质粒,你挑的菌落都是假阳性菌落,所以我建议以后挑菌落的时候多挑一些,虽然会麻烦一些,但是可以最大程度的保障实验结果。还有我觉得感受态的质量也会对实验记过产生一定影响。
5楼2012-05-19 09:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lifei_dut 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-22 21:54 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见