| 查看: 2424 | 回复: 4 | ||
xianzhaozhao木虫 (小有名气)
|
[求助]
脾脏总RNA提取及RT-PCR
|
|
第一次接触分子试验，不顺利，说出来请大家帮忙指点一下。 我试验的目的是牛akirin 2基因克隆与表达。具体操作如下： 1，去宰牛场等着采牛脾，牛从放血后经剥皮到脾脏采出大概50分钟，拿到脾脏后用剪刀剪碎，锡箔纸包裹，迅速放于液氮中。 2.用天根 Trizol A+ 试剂盒提取脾脏总RNA，取出脾脏后敲碎，取一小块在玻璃匀浆器中加trizol匀浆，在冰上，另一种方法是加Trizol ，用电动匀浆器匀浆，其余步骤按照试剂盒步骤操作，获得总RNA。 3.将电泳槽清洗H2O2处理，让后用DEPC水处理，电泳液和胶都是DEPC处理水新配，1%的胶，电压110，时间15分钟。结果如图，貌似有两条很浅的条带，，猜测可能是rna，但是最前边有很个亮疙瘩，是不是降解了。 4.用天根的试剂盒合成CDNA第一链。 5.然后进行PCR，上游引物：5' GAATTCGTGGAAGAGTCAGACAGTGCAGG 3' 下游引物：5' GGATCCTTGGAATCAGAACTCAGTTTATG 3' 退火温度试过60，58，55，都没有目标条带出来。 我得叙述是否清楚，该实验如何进行试验改进，问题出现在哪里？请各位不吝赐教，不胜感激。  |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- rna终于提取出来了，可是反转录pcr（rt pcr）没有条带
已经有19人回复
- 提取RNA与做RT-PCR的问题
已经有26人回复
- 昆虫触角总RNA提取疑问
已经有12人回复
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 新手提RNA，请教几个问题
已经有8人回复
- 柞蚕总RNA提取中，蛋白抽提不尽
已经有12人回复
- RNA浓度好低 适合做RT-PCR吗？
已经有7人回复
- 病毒RNA提取后做RT-PCR
已经有13人回复
- 【求助/交流】细菌总RNA的提取和RT-PCR
已经有8人回复
- 【求助/交流】帮我看看假丝酵母总RNA提取电泳图
已经有7人回复
- 【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带
已经有12人回复
- 【求助/交流】想问问天根植物总RNA提取试剂盒的使用
已经有9人回复
- 浙江大学2006年分子生物学考博
已经有8人回复
xianzhaozhao
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2996.7
- 帖子: 216
- 在线: 19.6小时
- 虫号: 325264
- 注册: 2007-03-17
- 性别: GG
- 专业: 中兽医学
2楼2012-05-17 07:13:12
3楼2012-05-17 09:16:09
4楼2012-05-17 09:18:34
xianzhaozhao
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2996.7
- 帖子: 216
- 在线: 19.6小时
- 虫号: 325264
- 注册: 2007-03-17
- 性别: GG
- 专业: 中兽医学
5楼2012-05-19 07:19:36
