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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA质量检测
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欢仔

银虫 (正式写手)

[求助] RNA质量检测

大家好，我在做RT-PCR  RNA提取完检测了下OD值 然后跑了电泳 结果都还不错，我第二天逆转录前 在跑电泳 条带很浅 不知道为什么 难道降解了啊  每次我RNA上样量是5ul  2ul的loadingbuffer  这样下来检测了两次 RNA就不多没了 质量也很差 你们都是怎么操作的啊
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勇于尝试新鲜事物
1楼 2012-05-05 17:31:38
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
欢仔: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-05-06 00:58:19
西瓜: 金币+2, 专家辛苦哈~ 2012-05-06 19:18:18
具体原因需要楼主上图才可以分析。但是如果将RNA放-20过夜甚至一两天都是没问题的，我觉得降解的可能性不大，最大的可能性是你溶解RNA的时候没混匀，两次测的浓度不一样
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2楼2012-05-05 18:46:05
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★ ★
西瓜: 金币+2, 确实如此啊 2012-05-06 19:18:38
我们都是现用现提现反转录。
其实RNA这东西很脆弱，如果没有污染的话，象楼上所说可以放在-80℃过夜。但是稍有污染（灰尘等），RNA就会很快降解，象级联放大反应一般降解。看到楼主的操作程序，估计是在测OD值的时候可能有污染吧！   建议现用现提现反转录，这样保险！
祝楼主实验顺利！！
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勤能补拙
3楼2012-05-05 18:56:58
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欢仔

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-05 18:46:05:
具体原因需要楼主上图才可以分析。但是如果将RNA放-20过夜甚至一两天都是没问题的，我觉得降解的可能性不大，最大的可能性是你溶解RNA的时候没混匀，两次测的浓度不一样

嗯嗯 好像跟我配的胶有关系 RNA用1%的胶跑的没2%的好
RNA用的胶的浓度和DNA的有什么区别 我不太理解
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勇于尝试新鲜事物
4楼2012-05-06 00:57:10
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欢仔

银虫 (正式写手)
内容已删除
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勇于尝试新鲜事物
5楼2012-05-06 00:58:01
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-06 19:18:50
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:48:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by 欢仔 at 2012-05-06 00:57:10:
嗯嗯 好像跟我配的胶有关系 RNA用1%的胶跑的没2%的好
RNA用的胶的浓度和DNA的有什么区别 我不太理解

RNA电泳 也是用1%的胶！没问题的！  楼主不妨把提取的RNA分为3份儿，一份用来电泳，一份儿用来测OD，剩下的一份提取完后立刻放在-80℃，等电泳结果出来如果质量好的话，把放在-80℃的那份儿用来反转录。  避免电泳，测OD过程中RNA污染降解！！
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勤能补拙
6楼2012-05-06 14:40:42
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欢仔

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-06 14:40:42:
RNA电泳 也是用1%的胶！没问题的！  楼主不妨把提取的RNA分为3份儿，一份用来电泳，一份儿用来测OD，剩下的一份提取完后立刻放在-80℃，等电泳结果出来如果质量好的话，把放在-80℃的那份儿用来反转录。  避免电 ...

嗯嗯 这个方法好 谢谢
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勇于尝试新鲜事物
7楼2012-05-06 16:20:11
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 虫虫辛苦了 2012-05-07 13:48:54
嗯...................
       1. 最好反转录接着RNA提取后一定要立即做 也就一个多小时时间
       2. 没有必要在每次反转录前再跑胶 浪费样品哦 一晚上的时间 若你是在-80度存放 基本是没有任何问题的 RNA很脆弱不假 但没有这么脆弱 -20度没有试过 不好说 RNA的存放主要注意的是反复冻融 而不是时间（我想没人会提好的RNA后半年后再反转录的吧）
       个人看法 若有说错请高手指点哦
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Let God do with it as He wills
8楼2012-05-06 21:35:47
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:49:04
没那么玄乎，我提的RNA，－20度放一周，也只降解了10%左右。

另外，测OD值和跑电泳的RNA，都是从提取的RNA中取 1-2 ul 稀释100倍后的稀释液来完成的。
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9楼2012-05-07 09:10:54
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