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欢仔

银虫 (正式写手)

[求助] RNA质量检测

大家好,我在做RT-PCR  RNA提取完检测了下OD值 然后跑了电泳 结果都还不错,我第二天逆转录前 在跑电泳 条带很浅 不知道为什么 难道降解了啊  每次我RNA上样量是5ul  2ul的loadingbuffer  这样下来检测了两次 RNA就不多没了 质量也很差 你们都是怎么操作的啊
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欢仔

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-05 18:46:05:
具体原因需要楼主上图才可以分析。但是如果将RNA放-20过夜甚至一两天都是没问题的,我觉得降解的可能性不大,最大的可能性是你溶解RNA的时候没混匀,两次测的浓度不一样

嗯嗯 好像跟我配的胶有关系 RNA用1%的胶跑的没2%的好
RNA用的胶的浓度和DNA的有什么区别 我不太理解
勇于尝试新鲜事物
4楼2012-05-06 00:57:10
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查看全部 9 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
欢仔: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-05-06 00:58:19
西瓜: 金币+2, 专家辛苦哈~ 2012-05-06 19:18:18
具体原因需要楼主上图才可以分析。但是如果将RNA放-20过夜甚至一两天都是没问题的,我觉得降解的可能性不大,最大的可能性是你溶解RNA的时候没混匀,两次测的浓度不一样
2楼2012-05-05 18:46:05
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

★ ★
西瓜: 金币+2, 确实如此啊 2012-05-06 19:18:38
我们都是现用现提现反转录。
其实RNA这东西很脆弱,如果没有污染的话,象楼上所说可以放在-80℃过夜。但是稍有污染(灰尘等),RNA就会很快降解,象级联放大反应一般降解。看到楼主的操作程序,估计是在测OD值的时候可能有污染吧!   建议现用现提现反转录,这样保险!
祝楼主实验顺利!!
勤能补拙
3楼2012-05-05 18:56:58
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-06 19:18:50
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:48:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by 欢仔 at 2012-05-06 00:57:10:
嗯嗯 好像跟我配的胶有关系 RNA用1%的胶跑的没2%的好
RNA用的胶的浓度和DNA的有什么区别 我不太理解

RNA电泳 也是用1%的胶!没问题的!  楼主不妨把提取的RNA分为3份儿,一份用来电泳,一份儿用来测OD,剩下的一份提取完后立刻放在-80℃,等电泳结果出来如果质量好的话,把放在-80℃的那份儿用来反转录。  避免电泳,测OD过程中RNA污染降解!!
勤能补拙
6楼2012-05-06 14:40:42
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