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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR苦无结果
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whyann

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR苦无结果

小弟最近PCR，苦无结果，也摸索了下条件，Mg2+浓度从0.5mM到15mM都是试过了，退火温度从45度到65度也做了梯度，我的引物For P:5-GCGCTACCGGACTCAGATC-3  Rev P:5-GATCTAGAGTCGCGGCCGC-3，还请高手指教，拜谢！！！Sample Text
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1楼 2012-05-03 23:25:47
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lihengyang86

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by laojiu9878 at 2012-05-04 08:34:57:
引物肯定有问题，gc含量太高，退火温度必需高一些，65以上，

您好！请问引物的GC含量如果大于65%，是不是很难有效地扩增出目的片段。如果要是坚持使用这种引物，是不是要尽可能的提高退火温度来扩增？谢谢！
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7楼2012-05-04 14:18:32
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 18:40:21
whyann: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:30:45
引物肯定有问题，gc含量太高，退火温度必需高一些，65以上，
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但愿人长久
2楼2012-05-04 08:34:57
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SaG_W

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whyann: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:31:30
从定引物试试，有时候合成的引物可能有问题，我以前也遇到过引物有问题。
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3楼2012-05-04 09:19:57
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whyann: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:31:42
引物GC含量太高，建议你另外选取一段来重新设计引物。
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4楼2012-05-04 09:43:31
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