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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR苦无结果
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whyann

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR苦无结果

小弟最近PCR，苦无结果，也摸索了下条件，Mg2+浓度从0.5mM到15mM都是试过了，退火温度从45度到65度也做了梯度，我的引物For P:5-GCGCTACCGGACTCAGATC-3  Rev P:5-GATCTAGAGTCGCGGCCGC-3，还请高手指教，拜谢！！！Sample Text
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1楼 2012-05-03 23:25:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 18:40:21
whyann: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:30:45
引物肯定有问题，gc含量太高，退火温度必需高一些，65以上，
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但愿人长久
2楼2012-05-04 08:34:57
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蚊在江湖

银虫 (小有名气)
我觉得有时候引物出不来就果断换一下引物
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6楼2012-05-04 10:19:27
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syn1985

木虫 (正式写手)
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流~镁离子个人感觉影响也不大呢 2012-05-06 19:10:20
mg离子一般不用改浓度，改了没啥效果，看看引物和模板有没有问题，这两个才是王道。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

whyann
11楼2012-05-05 14:24:52
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普通回帖

SaG_W

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whyann: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:31:30
从定引物试试，有时候合成的引物可能有问题，我以前也遇到过引物有问题。
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3楼2012-05-04 09:19:57
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whyann: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:31:42
引物GC含量太高，建议你另外选取一段来重新设计引物。
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4楼2012-05-04 09:43:31
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 18:42:40
whyann: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:32:22
刚上手做的时候不要着急,慢慢摸条件,但有些就不要做了,比如温度60度以下的退火温度,镁离子浓度高于4mM做了也没有多大意义
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5楼2012-05-04 09:47:34
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lihengyang86

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by laojiu9878 at 2012-05-04 08:34:57:
引物肯定有问题，gc含量太高，退火温度必需高一些，65以上，

您好！请问引物的GC含量如果大于65%，是不是很难有效地扩增出目的片段。如果要是坚持使用这种引物，是不是要尽可能的提高退火温度来扩增？谢谢！
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7楼2012-05-04 14:18:32
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whyann

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蚊在江湖 at 2012-05-04 10:19:27:
我觉得有时候引物出不来就果断换一下引物

有道理
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8楼2012-05-04 22:35:21
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whyann

银虫 (初入文坛)
内容已删除
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9楼2012-05-04 22:35:45
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anzaigtt

木虫 (著名写手)
片段多长？
和长度有很大的关系
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10楼2012-05-05 08:15:05
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