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sjscut

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助纯化蛋白质

想纯化一点蛋白质用于制备抗体,有没有好的办法吧,求教
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leibo15

禁虫 (小有名气)

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2楼2012-05-03 09:38:27
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

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纯化蛋白我们用的是重组质粒,带着标签,比如说GST或HIStag,需要重组质粒。
3楼2012-05-03 09:42:04
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duowan17

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你说的太宽泛了,现在纯化蛋白方法很多!
4楼2012-05-03 12:22:25
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草原之子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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用于制备抗体一般不用整个蛋白,一般只选用比较具有特异性的一段小肽。还有就是制备抗体的话除了表达和一般的beads纯化,还要FPLC以使蛋白纯度更高。
向生命发起挑战
5楼2012-05-03 12:39:25
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qianyr2008

铁虫 (初入文坛)

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感谢参与,应助指数 +1
一般也是带个标签的,然后跑SDS-PAGE,切下条带,用生理盐水捣碎,加入等体积的佐剂,就可以去注射了。我以前是这么做的。
6楼2012-05-03 13:07:11
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sswisdomss

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用蛋白A或蛋白G的亲合层析柱子来纯化蛋白得到IgG抗体,希望对你有帮助
7楼2012-05-03 15:32:17
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sjscut

铜虫 (小有名气)

我做这个比较麻烦,是未知蛋白,通过双向电泳分离后量又太少,所以不知道怎样能获得较高的量,用于制备抗体,
8楼2012-05-04 09:38:22
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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是天然蛋白吗?想制备大量的话就需要知道蛋白的核酸序列,然后构建表达载体进行蛋白大量表达后进行纯化。
9楼2012-05-04 12:45:47
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sjscut

铜虫 (小有名气)

能不能省去做表达这一步啊,
10楼2012-05-04 14:24:22
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