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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助纯化蛋白质
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sjscut

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助纯化蛋白质

想纯化一点蛋白质用于制备抗体，有没有好的办法吧，求教
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1楼 2012-05-03 08:44:47
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leibo15

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2012-05-03 09:38:27
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纯化蛋白我们用的是重组质粒，带着标签，比如说GST或HIStag,需要重组质粒。
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3楼2012-05-03 09:42:04
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duowan17

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的太宽泛了，现在纯化蛋白方法很多！
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4楼2012-05-03 12:22:25
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草原之子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用于制备抗体一般不用整个蛋白，一般只选用比较具有特异性的一段小肽。还有就是制备抗体的话除了表达和一般的beads纯化，还要FPLC以使蛋白纯度更高。
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向生命发起挑战
5楼2012-05-03 12:39:25
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qianyr2008

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般也是带个标签的，然后跑SDS-PAGE，切下条带，用生理盐水捣碎，加入等体积的佐剂，就可以去注射了。我以前是这么做的。
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6楼2012-05-03 13:07:11
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sswisdomss

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用蛋白A或蛋白G的亲合层析柱子来纯化蛋白得到IgG抗体，希望对你有帮助
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7楼2012-05-03 15:32:17
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sjscut

铜虫 (小有名气)
我做这个比较麻烦，是未知蛋白，通过双向电泳分离后量又太少，所以不知道怎样能获得较高的量，用于制备抗体，
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8楼2012-05-04 09:38:22
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是天然蛋白吗？想制备大量的话就需要知道蛋白的核酸序列，然后构建表达载体进行蛋白大量表达后进行纯化。
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9楼2012-05-04 12:45:47
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sjscut

铜虫 (小有名气)
能不能省去做表达这一步啊，
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10楼2012-05-04 14:24:22
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