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elbo

金虫 (小有名气)

[求助] PCR问题求教

扩增细菌16S rDNA,通用引物,反应体系25ul, 用TAKARA的premix,1ul模板(含量大于40ng/ul,每孔所用模板DNA不同),1.5ul引物(10umol/L)。扩增条件,94预变性3min,94,52,72各1min,25循环,72延伸10min。1%凝胶检测如下图,最左侧为不加模板的阴性对照.最右边为Marker(第4个带为1500bp).为什么只有个别扩增出来,而且怎么有这么多的引物二聚体?退后温度低?还是模板含量太少??
请各位达人不吝赐教啊!!

1% agarose
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)


西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 18:43:17
试着帮你分析:可能是引物相对于模板多了,你把引物加1微升试试。既然是通用引物,没必要怀疑设计不合理。还有就是你的模板,你说40ng/ul ,电泳检测的么?如果不是,电泳检测一下。
7楼2012-05-03 21:54:53
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