| 查看: 2270 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
双酶切连TA后切不开
|
||
|
各位大侠，这里看~~~ 一、我的目的片段已经与pMD-18Tsimple vector连接上之后，挑菌落pcr有目的条带呈阳性。 二、然后提质粒之后做双酶切。可是却切不开。用的是EcoR l 和Sal l两种酶，我做的是20ul体系，反应3h，37°c，水浴。 三、电泳结果，与未酶切的质粒条带做对比，条带跑到后面，EcoR l 单酶切了，但是Sal l与没有酶切组相同。 我考虑的问题： 因为我的pcr引物自加上了这两种酶切位点，但是当时没有考虑到保护碱基的特异性，都只是在酶切位点后加了一个A。是不是这个引物设计的时候出现问题了？ PS：酶活应该是没有问题的，因为用来切过实验室的其他载体，能切开的。 现在想要扩增这个片段，然后插入表达载体，但是一直切不开，很痛苦，做了一个多月了。大家请帮帮忙，八仙过海各显神通~~~本人不胜感激~！ |
回复此楼» 猜你喜欢
总分293求调剂
已经有3人回复
-
生物技术与工程
已经有3人回复
-
299求调剂
已经有9人回复
-
材料学硕，求调剂
已经有8人回复
-
284求调剂
已经有14人回复
-
292求调剂
已经有4人回复
-
287求调剂
已经有11人回复
-
086003食品工程求调剂
已经有6人回复
-
295求调剂
已经有8人回复
-
考研化学308分求调剂
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于xba I单酶切后的TA连接
已经有7人回复
- DNA双酶切后在两端加adapter的连接问题
已经有7人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- 双酶切的片段不见了？
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切求助
已经有19人回复
- 双酶切后目的条带下出现多个条带的原因
已经有9人回复
- 【求助/交流】双酶切连接不上的问题！谢谢！
已经有4人回复
- 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带
已经有12人回复
qianyr2008
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 34.5
- 帖子: 17
- 在线: 3.8小时
- 虫号: 624162
- 注册: 2008-10-12
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2012-05-03 13:11:34
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-05-01 12:10:40
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-05-01 12:10:40
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2012-05-01 11:43:53
3楼2012-05-01 14:01:12
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2012-05-01 15:22:26
