| 查看: 1863 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
alicelchf木虫 (著名写手)
|
[求助]
奇怪的PCR产物
|
|
|
构建的上下游引物分别携带了PsgI(NcoI同尾酶)、XhoI位点，得到目的片段产物，然后将其回收、双酶切消化、80度灭火； 载体经过NcoI、XhoI双酶切，电泳切胶回收。 按照不同片段和载体比例进行连接ligase，转化得到质粒（6700bp左右） 问题在于（1）我们的质粒无论是试剂盒、手提得到的浓度都很少，而且是两条带（附件一20120418 pet28-10）；转化至plate有菌落，但是经过再一次双酶切之后电泳完全看不到任何片段或是载体。是我们根本没连接上吗？ （2）我们以克隆的新载体作为模板进行PCR，得到的居然更多条带（附件二20120419 pm pcr 亚克隆），初步觉得是因为引物特异性比较差，因为引物较长而且有些比较特殊的要求导致无法简短、增加特异性；所以我都怀疑我们一直以来PCR出来的事原来模板的非目的片段。所以很想知道出现这么多条带的原因有可能是什么？ 顺带说一句，我们摇出来菌浑浊了，送去检测 nothing |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 20120418 pet28-10.jpg
- 附件 2 : 20120419 pcr 亚克隆.tif
2012-04-19 22:02:30, 9.76 K
2012-04-19 22:02:36, 1.25 M
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有73人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- red基因敲除转化子
已经有3人回复
- 荧光定量PCR的扩增曲线很奇怪，什么原因
已经有7人回复
- PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？
已经有10人回复
- 二次PCR产物弥散
已经有12人回复
- 空白也PCR出的两条带
已经有19人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 求助DGGE染色问题
已经有20人回复
- 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR产物电泳检测
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR产物酶切后，电泳时遇到的的问题，真心求教！
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助一个很奇怪的PCR现象
已经有23人回复
jimmy7633
木虫 (著名写手)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 14322.1
- 红花: 1
- 帖子: 1153
- 在线: 104.3小时
- 虫号: 727882
- 注册: 2009-03-21
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2012-04-21 18:52:26
sunwei57
木虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 4093.2
- 帖子: 225
- 在线: 84.5小时
- 虫号: 1696471
- 注册: 2012-03-16
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2012-04-19 22:46:18
alicelchf
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 2393.2
- 散金: 134
- 红花: 36
- 帖子: 2276
- 在线: 412.1小时
- 虫号: 1279368
- 注册: 2011-04-27
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
3楼2012-04-20 10:54:23
5楼2012-04-20 11:20:16
