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chlamy木虫 (小有名气)
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[求助]
酶切后未纯化连接出现的问题
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各位路过的虫友： 最近在做酶切连接的实验，由于质粒太大，回收效果太差，有时就酶切后直接连接，连接载体和片段的比例为1：10，挑了40个克隆检测，全为假阳性，又做了一次比例为1：100，挑了20个克隆，发现也全部为假阳性（就是质粒又重新连接了）。请问路过的各位做过这样实验的虫友，一般挑多少才会有我要的克隆呢？还是其他原因导致我的目的片段连接不上呢？ 对于酶切的结果，已经电泳检测，基本上酶切完全； 在此谢过。 |
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