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to-be

金虫 (正式写手)

MolEPI: 5
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专业: 神经生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
chlamy: 回帖置顶 2012-04-20 17:29:02
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good！ 2012-04-24 18:40:58

引用回帖:

8楼: Originally posted by chlamy at 2012-04-19 20:35:14:
的却可能存在你说的这种情况，质粒没有完全切开，但是我的质粒全长13K，双酶切开后长12K，电泳回收时也很难跑开，回收就挺难了。
对于酶切体系，是这样的。我们取其中的少部分来做连接。通过电泳条带可以很明显 ...

载体确实不小，
1.通过电泳都可以看出一个酶切开了，就代表还是可以通过跑胶将全长及酶切后的产物分开的，况且超螺旋会小很多，做个长胶，多跑会。
2.通过生长出来的菌落判断连接效率没有道理。
3.双酶切可以分步进行，不一定要在同一种buffer中同时加两个酶，这样会提高效率。
4.防止载体自连可以去磷酸化。