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weizhe34至尊木虫 (职业作家)
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[求助]
原核表达の不可思议的重组
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各位师兄师姐请帮我分析下：我做一个原核表达目的基因连在T载体上进过英俊公司测序成功，能找到目的片段，接着双酶切连接，酶切为双酶切时间4h，连接16℃过夜，跳单克隆，进过菌落pcr有目的片段的送检，但是检测结果出其意料，尽然为意外一个载体的T载体连接序列。 解释：我做了两个不同载体的原核表达，目的序列一样，只是设计的引物前面酶切和保护碱基不同，在这次重组测序结果出来时我很奇怪的发现，A载体重组的序列尽然为B载体与T载体的序列，这是什么原因？之前A.B载体连在T载体上测序结果都是对的。载体提取的质粒以及酶切都很正常。 |
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