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xifu521

新虫 (初入文坛)

[求助] Tris-Tricine SDS PAGE 电泳为何只跑出了marker?

昨天跑了一个Tris-Tricine SDS PAGE,marker是超低分子量(6个条带),分离胶浓度10%,上样后,开始30V 后来150V跑电泳,考马斯亮蓝染色,结果最后只出来了marker 条带,而且只有前四条,后面分子量4000左右和1016的低分子条带没有跑出来。
我自己分析了原因,可能是分离胶浓度低了,导致marker没有跑出来,但是样品上样量中蛋白质含量符合上样标准,为什么跑不出来呢?还有Marker没有跑全的原因还有别的吗?
谢谢大家看贴,虚心请教!

[ Last edited by xinmor on 2012-5-22 at 11:24 ]

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xifu521

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2楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-04-03 08:23:56:
会不会是时间跑久了把Marker给跑出去了?

有这个可能 但是不知道为什么样品没有跑出来
4楼2012-04-04 20:40:12
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3楼: Originally posted by lxmzhj1984 at 2012-04-03 16:02:14:
marker有时候是有问题的,我们实验室也是在公司买的marker,上面画的是10条带,但是最下面的两条带就是跑不出来,这个不用管,只要能确定你的蛋白大小就行了哦

哦 谢谢 但是样品没有跑出来 按照要求的蛋白浓度加样了 但是不行呢~
5楼2012-04-04 20:41:52
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6楼: Originally posted by mssj300130 at 2012-04-10 11:44:35:
首先你的样品及marker的分子量很小,溴酚蓝大概相当于10+K左右的条带,10%的话首先分辨率就不是太好,而且极其有可能你的marker跑下去了,另外你的样品多大也应该提供一下

谢谢 我又用了16%和20%的分离胶 还是只跑出来了marker... 唉...
7楼2012-04-10 14:46:31
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9楼: Originally posted by mssj300130 at 2012-04-10 15:35:49:
你的marker里有没有预染得,会不会是染色效果不好,尝试下别的染色,银染什么的

marker 跑得很好,样品不行。
10楼2012-04-10 18:10:16
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8楼: Originally posted by mssj300130 at 2012-04-10 15:33:05:
你这个是纯化产物吗,上样量按照检测结果得出的吗,会不会是杂质影响蛋白检测?

不是纯化的产物 就是酶解液 里面肯定有脂类糖类等 但是不加TCA的样品可以跑出条带来 加了的跑不出来
16楼2012-05-10 10:38:56
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12楼: Originally posted by rhguo at 2012-05-09 20:35:05:
上个图吧,我也在做这个,30v要跑多久,我直接80v,然后150不知道能不能跑出来

一开始80V有点高了, 30V跑到溴酚蓝落到分离胶开始 加电压到120-150V左右,而且高电压跑的时候建议加冰袋在旁边冷敷,否则温度过高 胶有可能融化
17楼2012-05-10 10:41:57
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