24小时热门版块排行榜    

查看: 2935  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

吴德光

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

B基因需要磷酸化A不用,然后用T4 DNA连接酶进行连接即可

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2012-05-03 23:35:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

鱼成双

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助,很专业的说 2012-05-04 13:39:25
想的太复杂了,不用什么磷酸酶处理两个片段,直接做个SOE-PCR(重叠延伸片段PCR)就搞定了,快速简单。你要拼接A、B两个片段,首先设计A的上有引物和B的下游引物,然后设计A的下游(3‘)和B的上游(5’),设计A的下游引物时顶着A的末端15~20个碱基,然后再加上10~15个B 的5‘碱基作为尾巴,同理设计B的上有引物也是这样。这样设计的引物互相以对方为模板,经过一个或者两个PCR反应就拼接完成了 。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-05-01 12:42:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吴德光

禁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
本帖内容被屏蔽

3楼2012-05-03 17:06:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyy_zzz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-04 13:39:45
吴德光: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你!我理解了 2012-05-06 09:34:09
扩增产物的5和3端都是羟基,酶切过后3端是羟基,5端是磷酸基团。所以,针对你的问题:AB都需要用磷酸激酶处理加上磷酸基团。至于酶切之前还是酶切之后好像没有关系。不过,这个就算你加了磷酸基团,AB的连接是平端连接,效率会比较低。所以,这种方式可能不是一种理想的连接方式(我自己做过,效果不理想)。
还是推荐重叠法,其实重叠法没有你想的那么难的。
4楼2012-05-03 21:44:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见