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1楼2012-04-02 12:54:39

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鱼成双

新虫 (初入文坛)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 23.5
帖子: 22
在线: 3.3小时
虫号: 1577327
注册: 2012-01-14
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很专业的说 2012-05-04 13:39:25

想的太复杂了，不用什么磷酸酶处理两个片段，直接做个SOE-PCR（重叠延伸片段PCR）就搞定了，快速简单。你要拼接A、B两个片段，首先设计A的上有引物和B的下游引物，然后设计A的下游（3‘）和B的上游（5’），设计A的下游引物时顶着A的末端15~20个碱基，然后再加上10~15个B 的5‘碱基作为尾巴，同理设计B的上有引物也是这样。这样设计的引物互相以对方为模板，经过一个或者两个PCR反应就拼接完成了。

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吴德光

2楼2012-05-01 12:42:23

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