24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2684  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

吴德光

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)


西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-07 17:53:14
2楼说的对的,直接做SOEPCR就好了,昨晚之后如果还需要连接入载体再加磷酸基,否则不需要
10楼2012-05-07 14:46:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

鱼成双

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助,很专业的说 2012-05-04 13:39:25
想的太复杂了,不用什么磷酸酶处理两个片段,直接做个SOE-PCR(重叠延伸片段PCR)就搞定了,快速简单。你要拼接A、B两个片段,首先设计A的上有引物和B的下游引物,然后设计A的下游(3‘)和B的上游(5’),设计A的下游引物时顶着A的末端15~20个碱基,然后再加上10~15个B 的5‘碱基作为尾巴,同理设计B的上有引物也是这样。这样设计的引物互相以对方为模板,经过一个或者两个PCR反应就拼接完成了 。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-05-01 12:42:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吴德光

禁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
本帖内容被屏蔽

3楼2012-05-03 17:06:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyy_zzz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-04 13:39:45
吴德光: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你!我理解了 2012-05-06 09:34:09
扩增产物的5和3端都是羟基,酶切过后3端是羟基,5端是磷酸基团。所以,针对你的问题:AB都需要用磷酸激酶处理加上磷酸基团。至于酶切之前还是酶切之后好像没有关系。不过,这个就算你加了磷酸基团,AB的连接是平端连接,效率会比较低。所以,这种方式可能不是一种理想的连接方式(我自己做过,效果不理想)。
还是推荐重叠法,其实重叠法没有你想的那么难的。
4楼2012-05-03 21:44:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +7 吃口冰激凌 2026-04-07 7/350 2026-04-08 22:49 by bljnqdcc
[考研] 301求调剂 +10 细胞相关蛋白 2026-04-03 10/500 2026-04-08 10:36 by tjzhao
[考研] 调剂求助(生物与医药) +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 080100力学316求调剂 +3 L_Hairui 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:26 by JourneyLucky
[考研] 生物调剂 +5 橙子橙子橙子啊 2026-04-05 9/450 2026-04-07 15:31 by 上岸快快
[考研] 081700化学工程与技术 一志愿中海洋 323 求调剂学校 +19 披星河 2026-04-03 19/950 2026-04-07 15:14 by 尽舜尧1
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +4 wos666 2026-04-03 5/250 2026-04-06 15:22 by wos666
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
[考研] 262求调剂 +7 天下第一文 2026-04-04 8/400 2026-04-05 21:31 by 激流勇渡
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
[考研] 0832食品科学与工程学硕282调剂 +6 鱼在水中游a 2026-04-02 9/450 2026-04-05 11:45 by flysky1234
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[考研] 278求调剂 +3 依旧! 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
信息提示
请填处理意见