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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 链霉菌有没有菌液PCR啊?

我做链霉菌同源重组 要筛到突变株要提很多管DNA 做PCR
我一般用CTAB法提 效果挺好 但是时间长 而且一个人提个20管都要累死了 不知道有没有像大肠杆菌那种直接可以做菌液PCR的
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

不用。你把PCR的体系配好,分装到PCR管里,当然模板是不用加的。然后用牙签挑一点点菌体到PCR管里,用移液枪反复吹吸一下把菌分散一下。然后就上PCR仪。第一循环热解时间可以长点,10min。第二循环开始就按正常的条件。

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8楼2012-03-29 20:20:50
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

应该可以。我们做梭菌都是可以的,但条件可能要摸索一下,比如变性时间,退火温度等。总的来说,菌液PCR要难做一点。
2楼2012-03-29 12:18:59
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syn1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-03-29 12:18:59:
应该可以。我们做梭菌都是可以的,但条件可能要摸索一下,比如变性时间,退火温度等。总的来说,菌液PCR要难做一点。

之前是不是需要用溶菌酶之类的处理一下 再用沸水煮一下啊
3楼2012-03-29 13:09:59
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

菌液离心收集后洗一下就可以了,然后用buffer悬浮。PCR时菌只要极少量就可以,可以做几个梯度。DNA聚合酶也需要多试几种,不同的酶效果可能不一样。
4楼2012-03-29 16:26:11
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